Презентация "Методы исследования желез внутренней секреции" – проект, доклад

Методы исследования желез внутренней секреции

1. Наблюдение результатов полного или частичного удаления (экстрипация, или эктомия) эндокринной железы.

В результате такой операции возникает дефицит соответствующих гормонов и нарушаются регулируемые ими функции. Например, при удалении паращитовидных желез гормон паратирин, поддерживающий уровень кальция в крови, снижается, в результате чего повышается нервно-мышечная возбудимость и возникает судорожный припадок. В ряде случаев операцию заменяют применением химических веществ, блокирующих функцию железы. Например, препарат аллоксан избирательно блокирует β-клетки островкового аппарата поджелудочной железы, продуцирующие инсулин.

2. Введение экстрактов, полученных из эндокринных желез, а также химически чистых гормонов и гормональных препаратов.

Если препарат введен нормальным животным возникает эффект избыточного гормонального действия. Если препарат введен животным, подвергнутым экстрипации соответствующей эндокринной железы, то состояние оперированного животного улучшается, т.е. имеет место результат замещения недостающего гормона.

3. Трансплантация (пересадка) эндокринных желез

У животного удаляют исследуемую железу и наблюдают развивающиеся изменения. Затем удаленную железу или аналогичную железу другого животного (донора) пересаживают в другой участок тела, обеспечивая сосудистую связь железы с организмом. Если после пересадки нарушенные функции нормализуются - изучаемая железа обладает внутренней секрецией. Этот метод применяют и с целью создания избыточной продукции гормона; для этого интактному животному-реципиенту пересаживают несколько одноименных желез донора.

4. Метод эксплантации эндокринных желез

Эндокринные железы, кусочки их ткани помещают в питательную среду (in vitro), поддерживающую жизнедеятельность клеток. Исследуют содержание гормонов в питательной среде, по которому судят о качественной и количественной сторонах гормонообразования клетками железы, влиянии на них других гормонов и химических веществ. При инкубировании поджелудочной железы в среде с различной концентрацией глюкозы установлено, что повышение уровня глюкозы в среде активирует секрецию инсулина. Аналогично было установлено, что инсулин секретируется лишь при определенной концентрации кальция в среде.

5. Введение радиоактивной метки.

В организм вводят радиоактивный изотоп, необходимый для синтеза гормона, или меченый радиоактивной меткой гормон, а затем следят за их судьбой в организме, определяя радиоактивность различных органов и биологических жидкостей. Например, у людей для исследования функционального состояния щитовидной железы вводят радиоактивный 131I, большая часть которого захватывается щитовидной железой для синтеза тироксина и трийодтиронина. При гиперфункции щитовидной железы накопление йода усиливается, при гипофункции наблюдается обратный эффект.

6. Ауторадиография

В организм животного вводят радиоактивные гормоны или радиоактивные вещества, которые затем включаются в молекулу гормона. Через определенный промежуток времени у животного берут кусочки тканей и приготовляют из них срезы, помещая их на фотопленку с эмульсией, чувствительной к излучению. После проявления участки пленки, подвергшиеся действию радиоактивного излучения, чернеют. Таким образом устанавливают распределение гормона в органе, субклеточных структурах. Например, с помощью этого метода было выявлено, что женский половой гормон эстрадиол поглощается не только половыми органами, но и областями мозга, контролирующими половое поведение.

7. Определение содержания гомонов и их метаболитов в биологических жидкостях.

Используют: биологические методы. Оценивают структурные, функциональные и биохимические изменения, происходящие у животных in vivo или же в тканях или клетках in vitro после добавления в питательную среду исследуемой биологической жидкости. Так, биологический метод определения окситоцина основан на способности этого гормона усиливать отдачу молока молочной железой лактирующей крысы in vivo или кусочками ее ткани in vitro.

химические методы: измерение концентрации гормонов в плазме или сыворотке крови способами флюорометрии, спектрального анализа и др. иммунологические методы основаны на образовании комплекса гормон (антиген) – специфическое антитело (антисыворотка). они включают: - радиоиммунологические методы, в которых принципы иммунологического анализа сочетаются с применением меченых радиоизотопами гормонов. - методы конкурентного связывания (вытеснение определяемым гормоном гормона, меченного радиоактивным изотопом).

Определение содержания гормонов проводят, применяя нагрузочные тесты, так как уровень гормонов в покое и натощак не всегда в полной мере позволяет оценить функциональное состояние эндокринной железы. Например, при легких формах сахарного диабета содержание инсулина в крови может быть в пределах нормы, но после нагрузки глюкозой оно возрастает меньше, чем у здоровых людей. Определяют гормоны и их метаболиты в моче, собранной за сутки или за определенную часть суток. Однако, неполноценная работа печени и почек может дать неправильное представление о функции эндокринной железы.

8. Метод флуоресцирующих антител.

Метод дает возможность устанавливать тонкую локализацию ряда гормонов. В основе метода лежит способность гормонов белкового или полипептидного происхождения выявлять видовую специфичность, т.е. действовать в качестве антигенов при введении в чужеродный организм. Например, после введения кролику гормона роста свиньи у кролика образуются антитела к нему. Антитела выделяют и соединяют с каким-либо флуоресцентным веществом, в результате получаются флуоресцирующие антитела. Если такими флуоресцирующими антителами обработать срез ткани свиньи, в котором содержится гормон роста, произойдет соединение антигена (гормона) и флуоресцирующего антитела с образование антиген-антитело. Комплекс флуоресцирует, поэтому дает возможность определить локализацию гормона. Таким методом было установлено, что инсулин образуется в β-клетках островкового аппарата поджелудочной железы.

9. Определение концентрации рецепторов гормонов и их специфического связывания.

Специальные методы позволяют выделить отдельные рецепторы эстрадиола, прогестерона, инсулина и др. гормонов, находящихся как на мембранной, так и цитозольной или ядерной фракции клеток различных органов. Метод важен, поскольку даже высокое содержание гормона в крови недостаточно для реализации его эффекта, если рецептор малоактивен к этому гормону.