Презентация "Цветные реакции белков.Качественные реакции на остатки аминокислот." по химии – проект, доклад

Цветные реакции белков

Качественные реакции на остатки аминокислот

Указатель реакций

Биуретовая Уравнение реакции Проведение опыта Нингидриновая Ксантопротеиновая Уравнение реакции Проведение опыта Миллона Гопкинса-Коле Диазореакция Паули

Функция качественных реакций

Для аминокислот, постоянно встречающихся в составе белков, разработано множество цветных (в том числе именных) реакций. Многие из них высокоспецифичны, что позволяет определять ничтожные количества той или иной аминокислоты. Надо помнить, что все качественные реакции – это реакции не собственно на белки, а на определенные аминокислоты, входящие в их состав.

Аминокислоты

Основной структурной единицей белков служат a-аминокислоты. В состав большинства природных белков входит около 20 a-аминокислот. Качественные реакции служат как для определения принадлежности вещества к классу белков, так и для идентификации входящих в его состав аминокислот

Наиболее распространенные аминокислоты см. таблицу

Биуретовая реакция

Определяет наличие пептидной связи в растворе исследуемого соединения.

пептидная связь

Реакция обусловлена образованием биуретового комплекса в результате соединения меди с пептидной группировкой белка. В пептидах и белках пептидная связь обычно находится в амидной форме (или кетоформе), но в щелочной среде она переходит в иминольную (енольную):

Биуретовая реакция протекает так:

+CuSO4 +NaOH

Нингидриновая реакция

Качественная реакция на  -аминокислоты Аминокислота с нингидрином образует продукт конденсации типа азометина

путем перегруппировки

и гидролиза

образуется 2-аминоиндандион

2-аминоиндандион реагирует с нингидрином и дает краситель.

Ксантопротеиновая реакция

Определяет присутствие в белке ароматических и гетероциклических  - аминокислот : триптофана, фенилаланина, тирозина, гистидина.

+HNO3

Реакция Миллона

Это реакция на аминокислоту тирозин

Реактив Миллона (раствор HgNO3 и Hg(NO2)2 в разбавленной HNO3, содержащей примесь HNO2) взаимодействует с тирозином с образованием ртутной соли нитропроизводного тирозина, окрашенной в розовато-красный цвет:

+HgNO3 +Hg(NO2)2 +HNO3 +HNO2

Рекомендации к проведению опыта

К 2 мл концентрированного раствора тирозина прибавляют ~1 мл реактива Миллона встряхивают осторожно нагревают пробирки на пламени спиртовки. Образуется красное окрашивание.

Реакция Гопкинса–Коле

Эта реакция определяет аминокислоту триптофан.

Из глиоксиловой кислоты под действием концентрированной серной кислоты сначала получается формальдегид:

СО2

формальдегид затем конденсируется с триптофаном:

Продукт конденсации окисляется до бис-2-триптофанилкарбинола, который в присутствии минеральных кислот образует соли, окрашенные в сине-фиолетовый цвет:

Охладить до 0 °С насыщенного раствора щавелевой кислоты К 2 г порошка магния (слегка увлажненного) добавить щавелевую кислоту Полученный осадок оксалата магния отфильтровать и декантировать небольшим количеством воды. Фильтрат подкислить уксусной кислотой и довести до объема 200 мл (полученный раствор хранить в холодильнике!). Это и есть глиоксиловая кислота. 1 мл 0,005%-го раствора триптофана смешать с равным объемом глиоксиловой кислоты и к смеси прибавляют 10 капель раствора сульфата меди(II). Небольшими порциями добавляют 2–3 мл концентрированной серной кислоты, охлаждая пробирку после приливания очередной порции кислоты током холодной воды (или в ванночке со льдом). Полученную смесь оставляют на 10 мин при комнатной температуре, после чего ставят на 5 мин в кипящую водяную баню. Наблюдается образование сине-фиолетового окрашивания

Реакция Паули (Диазореакция Паули)

Эта реакция аминокислоту гистидин.

при взаимодействии кислого раствора сульфаниловой кислоты с нитритом натрия образуется диазобензолсульфоновая кислота:

Диазобензолсульфоновая кислота, взаимодействуя с гистидином, дает соединение вишнево-красного цвета:

В пробирку наливают 1 мл 1%-го раствора сульфаниловой кислоты в 5%-м растворе соляной кислоты. Прибавляют 2 мл 0,5%-го раствора нитрита натрия Сильно встряхивают Немедленно приливают 2 мл 0,01%-го раствора гистидина После перемешивания содержимого пробирки сразу приливают 6 мл 10%-го раствора соды. Появляется интенсивная вишнево-красная окраска.