Презентация "ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ" – проект, доклад

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Целоусова Ольга Сергеевна к.б.н., ассистент

Кафедра Биологии

Гельминтозы-заболевания вызываемые паразитическими червями (гельминтами).

Диагностика гельминтозов

Для обнаружения гельминтов, их фрагментов (проглоттид. сколексов), личинок или яиц исследуют: кал, мочу, мокроту, дуоденальное содержимое, кровь. Исследование испражнений (копрологическое исследование) наиболее распространенное.

Микроскопические методы Овогельминтоскопия

1. Нативный мазок Ход исследования: небольшой кусочек испражнений переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка. Недостатки метода: при небольшом количестве яиц в испражнениях их не всегда удается выявить, поэтому применение только этого метода не является полноценным и достоверным.

2. Толстый мазок (метод Като) Принцип метода: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке фекалий, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовой зеленью. Предварительно гидрофильный целлофан, нарезают пластинками 20x40 мм и погружают на сутки в раствор: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола.3-5 мл указанной смеси достаточно для обработки 100 пластинок, которые затем хранят в этом же растворе в хорошо закрытом сосуде. Ход исследования:100 мг фекалий наносят на предметное стекло, покрывают пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой. Преимущества метода: позволяет исследовать значительный объем испражнений; выявить яйца аскариды, власоглава, лентеца, трематод, тениид. Недостатки метода: не эффективен для выявления яиц анкилостомид и карликового цепня

3.Методы Флотации (всплывания) Метод Фюллеборна Метод Калантарян Принцип методов: основаны на разности удельного веса яиц и применяемого раствора. При большем удельном весе раствора яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Наиболее эффективны для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карликового цепня.

3.Методы Флотации (всплывания) Метод Фюллеборна Принцип метода: всплывание яиц гельминтов в насыщенном растворе NaCl (хлорида натрия) с высокой плотностью (1,18-1,22). Ход исследования: 400 г NaCl растворяют в 1 л воды при кипячении. В банку объемом 30-50 мл помещают 2-3 г фекалий и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор NaCl. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие крупные частицы. Отстаивают 45-60 мин., проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина. Готовят несколько препаратов. Дополнительно просматривают 2-4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца. Образуют осадок - яйца трематод и тениид, неоплодотворенные яица аскарид. Преимущества метода: дешевизна и доступность Недостатки - необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.

3.Методы Флотации (всплывания) Метод Калантарян Принцип метода: основаны на разности удельного веса яиц и насыщенного раствора азотнокислого натрия (1,4). При большем удельном весе раствора яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Преимущества метода: быстро всплывают и обнаруживаются в поверхностной пленке яйца большинства гельминтов, что исключает необходимость исследования осадка. Недостатки - высокая стоимость нитрата натрия ограничивает применение данного метода; не выявляет онкосферы тениид и яйца трематод (тонут). PS. НЕОБХОДИМО сочетать метод Като и метод Фюллеборна

3.Метод осаждения (седиментации) Уксусно-эфирный метод Принцип метода: если удельный вес яиц больше удельного веса жидкости, то яйца концентрируются в осадке, который исследуют под микроскопом. Этот метод применяют для обнаружения яиц трематод (диагностика описторхоза и других трематодозов). Ход исследования: в цилиндр для центрифугирования наливают 7 мл 5% раствора уксусной кислоты и формалина. Добавляют фекалии до 8 мл (1 гр.). Осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в цилиндр до 8 мл, добавляют 2 мл эфира. Центрифугируют при 1,5 тыс оборотах в течении 3 мин. Раствор разделяется на следующие фазы: эфир, каловая пробка, раствор уксусной кислоты и формалина, и осадок содержащий яйца трематод. Надосадочные фазы сливают. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Специальные методы

Диагностика энтеробиоза 1. Метод липкой ленты Ход исследования: кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4-5 см липким слоем прикладывают через анус к перианальным складкам, сразу же снимают и приклеивают на предметное стекло. Полученные таким образом препараты микроскопируют. Преимущества быстрота и возможности длительного хранения препаратов. 2. Соскоб с перианальных складок Ход исследования: стеклянной палочкой берут соскоб с перианальных складок и переносят в каплю 50%раствора глицерина на предметное стекло, накрывают покровным и микроскопируют.

Диагностика трихинеллеза 1. Метод биопсии мышц Принцип метода: Исследуют мышцы больного и остатки мяса животных, послуживших причиной заражения человека. Для анализа чаще берут кусочек (несколько граммов) дельтовидной или икроножной мышцы в асептических условиях. Ход исследования: Мышцу измельчают ножницами и помещают между двумя толстыми стеклами (компрессорий) слегка раздавливают и просматривают на малом увеличении микроскопа. Внутри мышечных волокон обнаруживаются спирально свернутые личинки трихинелл в округлых или лимонообразных капсулах.

2. Метод переваривания мышц Ход исследования: мелко нарезанные мышцы заливают искусственным желудочным соком (1% раствор пепсина в 0,7% растворе соляной кислоты) и помещают в термостат при 37°С на 12-16 часов. Объем желудочного сока должен превышать навеску мышц в 15-20 раз. После переваривания на предметное стекло пипеткой переносят осадок и микроскопируют. В осадке обнаруживаются свободные от капсул личинки трихинелл. Преимущества метода: наиболее эффективен.

Диагностика трихинеллеза

Диагностика филяриатозов Метод мазка крови и толстой капли Кровь берут в асептических условиях из пальца преимущественно ночью. Для приготовления мазка каплю крови помещают на предметное стекло и краем второго стекла размазывают ее по стеклу. Мазок фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Для приготовления толстой капли берут несколько капель крови на предметное стекло и углом другого стекла круговыми движениями размазывают ее до получения пятна, диаметром около 1,5 см. После высушивания эритроциты гемолизируют дистиллированной водой и окрашивают по Романовскому-Гимза. Михрофиллярии выявляются в виде тонких извитых нитей, окрашенных в голубой цвет.

лоа лоа онхоцерк вухерерия

ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ

БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ 